PCR試劑盒原理是由一對引物介導,能在動(dòng)植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
使用方法:
一、稀釋PCR陽(yáng)性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對照。
2. 標記6個(gè)離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽(yáng)性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對照。放冰上待用。
產(chǎn)品及特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶(hù)只需要提供伴放線(xiàn)放線(xiàn)桿菌樣品。
2. 根據伴放線(xiàn)放線(xiàn)桿菌保守序列設計的專(zhuān)一性引物,與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續污染。
5. 產(chǎn)品僅用于科研本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
運輸及保存:
低溫運輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX(根據機型決定,具體見(jiàn)使用方法)。